淋巴瘤NGS Ig/TCR克隆性重排检测
CSCO淋巴瘤诊疗指南2020版中指出Ig/TCR克隆性重排检测可辅助: ①良、恶性较难鉴别的病变;②疑似淋巴瘤;③某些特定病种的诊断与鉴别;④细胞构成较复杂或免疫标记难以区分细胞系的肿瘤;⑤肿瘤克隆相关性分析;⑥微小残留病灶评估。
CSCO淋巴瘤诊疗指南2020版中指出Ig/TCR克隆性重排检测可辅助: ①良、恶性较难鉴别的病变;②疑似淋巴瘤;③某些特定病种的诊断与鉴别;④细胞构成较复杂或免疫标记难以区分细胞系的肿瘤;⑤肿瘤克隆相关性分析;⑥微小残留病灶评估。
淋巴瘤NGS Ig/TCR克隆性重排检测
一、T/B淋巴细胞受体重排检测对淋巴瘤诊疗的意义
T/B淋巴细胞发育成熟时会发生受体基因重排的现象,这个特征在淋巴瘤诊疗中发挥着重要作用。CSCO淋巴瘤诊疗指南2020版中指出Ig/TCR克隆性重排检测可辅助:
①良、恶性较难鉴别的病变;
②疑似淋巴瘤;
③某些特定病种的诊断与鉴别;
④细胞构成较复杂或免疫标记难以区分细胞系的肿瘤;
⑤肿瘤克隆相关性分析;
⑥微小残留病灶评估。
NCCN B细胞淋巴瘤2020年版本1中指出,当淋巴结不易进行切除或切开活检时,结合芯针活检以及适当的辅助技术(免疫球蛋白重链变量的分子分析 [IGHV] 和T 细胞受体 [TCR] 基因重排)进行鉴别诊断。
二、泛因医学NGS Ig/TCR克隆性重排检测产品
1、 产品组成
检测范围包含IGH VDJ及DJ、IGKL VJ及TRB VDJ及DJ、TRG VJ,同时加入质控品进行质控。
2、产品原理
通过IGH VDJ及DJ、IGKL VJ引物组合或TRB VDJ及DJ、TRG VJ引物组合进行多重PCR扩增测序,分析是否存在克隆性重排,同时可以分析V区超突变率。
3、产品优势
(1) 精确到克隆序列及频率,可追踪监测,降低假阳性和假阴性。CE法无法区分相同长 度不同序列的克隆,会误判为寡克隆而造成假阳性;对范围内外的峰无法区分是否为同一克隆,会误判为多克隆而造成假阴性;在肿瘤负荷比较低的多克隆背景下,肿瘤克隆的峰值会比较低,CE法难以判断是否有单克隆增殖现象。
(2)准确灵敏的实验系统,同时扩增多条受体链提高肿瘤细胞的检出率。该系统是基于准确无偏的Ig/TCR多重PCR技术进行重排检测的。B淋巴细胞受体重排检测包括IGH、IGK、IGL,T淋巴细胞受体重排检测包括TRB和TRG 。
(3)操作方便快捷。全程可自动化操作,T/B同时检测只需2个反应管,一管扩增Ig,一管扩增TCR。一次性实验既可分析重排克隆,又可分析V区突变。
(4)可用于后续样品MRD检测,灵敏度高达10-6,预测复发和生存率。建立在无偏扩增系统上,同时不受肿瘤细胞表面抗原漂移及克隆进化的影响。
4、方法比较
电泳法(GEL/CE法) | 测序毛细管电泳法 | NGS克隆性重排检测法 | |
检测原理 | 用Ig、TCR目的片段大小范围中的主带鉴定是否克隆性增生 | 用Ig、TCR目的片段大小范围中的主带鉴定是否克隆性增生 | 用Ig、TCR测序数据中克隆序列和频率鉴定是否克隆性增生 |
V区突变检测 | 否,没有获得序列 | 能,产物纯度要求高,否则要先切胶或者TA克隆 | 能,一次性获得所需信息 |
同时检测2个或以上肿瘤克隆 | 否 | 能,挑克隆测序 | 能,可以获得克隆及频率 |
同时检测多条链 | 否,无法测序 | 否,无法混合测序 | 能,混合一个lane/run上机 |
三、临床应用场景
覆盖淋巴瘤诊疗全病程,辅助淋巴瘤精准诊疗。
1、 辅助鉴别良、恶淋巴瘤及疑似淋巴瘤(单克隆/多克隆);
2、 辅助鉴别淋巴瘤的种类(B细胞淋巴瘤/T细胞淋巴瘤);
3、 根据重排形式辅助鉴定淋巴瘤成熟度(V区突变率);
4、 辅助选择治疗方法(惰性淋巴瘤组织学转化程度);
5、 预后判断,慢性淋巴细胞性白血病国际预后指数中IGHV基因是否有突变是其中一项指标(IGHV突变比例2%预后较好,<2%预后较差);
6、 辅助鉴别惰性淋巴瘤的组织学转化(分析肿瘤克隆的相关性)。
四、送样要求
样本类型 | 样本特征 | 样本规格 | 运输要求 |
石蜡组织切片 | 石蜡切片 | 厚度5-8μm,5-10张 | 常温 |
新鲜组织 | 病灶部位 | >1cm3 | 冻存后干冰 |
骨髓 | 新鲜骨髓液(有浸润依据) | >2ml
| EDTA 抗凝管低温 |
外周血 | 新鲜或冻存外周血 | >2ml | 新鲜低温或冻存后干冰 |
DNA | 浓度>25ng/ul | 治疗前>0.5μg | 低温 |
五、产品流程
检测周期14个自然日。
深圳市龙岗区甘李路3号恒特美大厦A座3楼; 深圳市龙岗区甘李五路1号科伦特研发大厦402。