淋巴瘤NGS Ig/TCR克隆性重排检测

CSCO淋巴瘤诊疗指南2020版中指出Ig/TCR克隆性重排检测可辅助: ①良、恶性较难鉴别的病变;②疑似淋巴瘤;③某些特定病种的诊断与鉴别;④细胞构成较复杂或免疫标记难以区分细胞系的肿瘤;⑤肿瘤克隆相关性分析;⑥微小残留病灶评估。

淋巴瘤NGS Ig/TCR克隆性重排检测

一、T/B淋巴细胞受体重排检测对淋巴瘤诊疗的意义

T/B淋巴细胞发育成熟时会发生受体基因重排的现象,这个特征在淋巴瘤诊疗中发挥着重要作用。CSCO淋巴瘤诊疗指南2020版中指出Ig/TCR克隆性重排检测可辅助: 

    ①良、恶性较难鉴别的病变;

    ②疑似淋巴瘤;

    ③某些特定病种的诊断与鉴别;

    ④细胞构成较复杂或免疫标记难以区分细胞系的肿瘤;

    ⑤肿瘤克隆相关性分析;

    ⑥微小残留病灶评估。

NCCN B细胞淋巴瘤2020年版本1中指出,当淋巴结不易进行切除或切开活检时,结合芯针活检以及适当的辅助技术(免疫球蛋白重链变量的分子分析 [IGHV] T 细胞受体 [TCR] 基因重排)进行鉴别诊断。

二、泛因医学NGS Ig/TCR克隆性重排检测产品

1、  产品组成

        检测范围包含IGH VDJDJIGKL VJTRB VDJDJTRG VJ,同时加入质控品进行质控。

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2、产品原理

    通过IGH VDJDJIGKL VJ引物组合或TRB VDJDJTRG VJ引物组合进行多重PCR扩增测序,分析是否存在克隆性重排,同时可以分析V区超突变率。

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3、产品优势

(1)        精确到克隆序列及频率,可追踪监测,降低假阳性和假阴性。CE法无法区分相同长  度不同序列的克隆,会误判为寡克隆而造成假阳性;对范围内外的峰无法区分是否为同一克隆,会误判为多克隆而造成假阴性;在肿瘤负荷比较低的多克隆背景下,肿瘤克隆的峰值会比较低,CE法难以判断是否有单克隆增殖现象。

2准确灵敏的实验系统,同时扩增多条受体链提高肿瘤细胞的检出率。该系统是基于准确无偏的Ig/TCR多重PCR技术进行重排检测的。B淋巴细胞受体重排检测包括IGHIGKIGLT淋巴细胞受体重排检测包括TRBTRG

3操作方便快捷。全程可自动化操作,T/B同时检测只需2个反应管,一管扩增Ig,一管扩增TCR。一次性实验既可分析重排克隆,又可分析V区突变。

4可用于后续样品MRD检测,灵敏度高达10-6,预测复发和生存率。建立在无偏扩增系统上,同时不受肿瘤细胞表面抗原漂移及克隆进化的影响。


4、方法比较



电泳法(GEL/CE法)

测序毛细管电泳法

NGS克隆性重排检测法

检测原理

IgTCR目的片段大小范围中的主带鉴定是否克隆性增生

IgTCR目的片段大小范围中的主带鉴定是否克隆性增生

IgTCR测序数据中克隆序列和频率鉴定是否克隆性增生

V区突变检测

否,没有获得序列

能,产物纯度要求高,否则要先切胶或者TA克隆

能,一次性获得所需信息

同时检测2个或以上肿瘤克隆

能,挑克隆测序

能,可以获得克隆及频率

同时检测多条链

否,无法测序

否,无法混合测序

能,混合一个lane/run上机


三、临床应用场景

    覆盖淋巴瘤诊疗全病程,辅助淋巴瘤精准诊疗。

        1、  辅助鉴别良、恶淋巴瘤及疑似淋巴瘤(单克隆/多克隆)

        2、  辅助鉴别淋巴瘤的种类(B细胞淋巴瘤/T细胞淋巴瘤);

        3、  根据重排形式辅助鉴定淋巴瘤成熟度(V区突变率);

        4、  辅助选择治疗方法(惰性淋巴瘤组织学转化程度);

        5、  预后判断,慢性淋巴细胞性白血病国际预后指数中IGHV基因是否有突变是其中一项指标(IGHV突变比例图片关键词2%预后较好,<2%预后较差);

        6、  辅助鉴别惰性淋巴瘤的组织学转化(分析肿瘤克隆的相关性)

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四、送样要求


样本类型

样本特征

样本规格

运输要求

石蜡组织切片

石蜡切片

厚度5-8μm5-10

常温

新鲜组织

病灶部位

>1cm3

冻存后干冰

骨髓

新鲜骨髓液(有浸润依据)

>2ml

       

EDTA 抗凝管低温

外周血

新鲜或冻存外周血

>2ml

新鲜低温或冻存后干冰

DNA

浓度>25ng/ul

治疗前>0.5μg

低温


五、产品流程

检测周期14个自然日。

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